小心移去乙醇,室温放置直至可见的痕量乙醇
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假定80%回收率，计算放射性标记引物的比活性。引物的比活性应为2X10°cpm/pmol。寡核苷酸引物的杂交和延伸
9.混合10*-10cpm(20~40fmo1)的DNA引物和0.5~ug的待测RNA.加入0.1倍体积的3mol/L乙酸钠(pH5.2)和2.5倍体积的乙醇，置于-70°C60min。
用微型离心机最大转速于4C离心10min回收RNA。用70%乙醇洗沉淀，再次离心。小心移去乙醇，室温放置直至可见的痕量乙醇挥发尽。
引物的摩尔數应该10倍过量于模板RNA(参阅方案16前“RNA作图引言”中的关于“优化引物延伸反应”的讨论)。
10.每管用8μLTE(pH7.6)重悬沉淀。用移液器反复抽吸样品几次使沉淀溶解。
11.加入2.2μL1.25mol/LKCl。轻轻混匀，用微型离心机离心2s使液体沉于管底。
12.将寡核苷酸/RNA混合物置于适当复性温度的水浴中。在通过预实验确定的最适温度(参阅方案16前“RNA作图引言”中的关于“优化引物延伸反应”的讨论)下温育15mino
13.在寡核苷酸和RNA复性时，按如下所述向引物延伸混合物中加入二硫苏糖醇和反转录酶：在冰上溶解μL引物延伸混合物，然后加入3μL1mol/L二硫苏糖醇和终浓度为1~2U/uL的反转录酶。
加入0.1U/uL的RNase的蛋白质抑制剂，倒转几次轻轻混匀，保存于冰上。可以通过在反应混合物中加入双脱氧核苷酸(终止物)来确定引物延伸产物的DNA序列。
